前培養（IVS）

テトラマー解析前に、IVS（in vitro sensitization）による前培養を2週間行います。IVSは試験管内での抗原刺激によって抗原特異的T細胞の活性化や増殖を促す方法です。がん抗原特異的T細胞など、存在頻度の低い細胞を検出する場合に実施を推奨しています。（前培養なしでのご依頼も可能です。）

カスタムテトラマー作製
（オプション）

ご提供いただいた抗原ペプチドを用いて、解析に使用する蛍光標識MHCテトラマーを作製します。（QuickSwitch Quant Tetramer Kitを使用）

※対象：HLA-A*02:01およびHLA-A*24:02

※ペプチドのHLAに対する結合親和性が低い場合、MHCテトラマーを作製できないことがあります。

テトラマー染色

蛍光標識したMHCテトラマーとＴ細胞表面に発現しているT細胞受容体が結合します。

フローサイトメトリー
による検出

フローサイトメトリーにより、蛍光標識MHCテトラマーに結合した抗原特異的T細胞を直接検出します。

データ解析

抗原特異的T細胞（MHCテトラマー陽性細胞）の存在率を算出します。

受託項目

MHCテトラマー解析		PBMCの前培養後、MHCテトラマーを用いてテトラマー解析を行います。 ※使用するMHCテトラマーは、ご提供いただくか、オプションの「カスタムテトラマー作製」を合わせてご依頼ください。 ※前培養が不要な場合はご相談ください。
オプション	カスタムテトラマー 作製	抗原ペプチドをご提供いただき、解析に使用する蛍光標識MHCテトラマーをカスタムで作製します。（対象：HLA-A*02:01およびHLA-A*24:02）
	抗原特異的T細胞の分離・回収 （セルソーティング）	MHCテトラマーにより標識したオプションMHC陽性細胞をセルソーターを用いて分離・回収します。別途「T細胞受容体（TCR）レパトア解析」を組み合わせてご依頼いただくことも可能です。

解析項目	材料	必要量	保存容器	保存方法	備考
MHCテトラマー解析	ヒトPBMC	6×106 cells程度 （抗原ペプチド1種類あたり） 解析条件に依存するため要相談	1.5～2 mL チューブ	細胞保存液を添加し、 -80℃
	抗原ペプチド	粉末 2 mg （凍結乾燥、純度95%以上）	0.5～2 mL チューブ	各ペプチドの最適保存 条件にて保存	抗原ペプチドによる前培養を行う場合。詳細は個別にご相談ください。
	MHCテトラマー （既製品）	25 μL	0.5～2 mL チューブ （遮光）	4℃（遮光）	オプション「カスタムテトラマー作製」をご依頼いただく場合は不要
カスタムテトラマー作製	抗原ペプチド	粉末 1 mg （凍結乾燥、純度95%以上）	0.5～2 mL チューブ	各ペプチドの最適保存 条件にて保存	対象：HLA-A*02:01 HLA-A*24:02
抗原特異的T細胞の 分離・回収	別途お問い合わせください。

MHCテトラマー解析	ドットプロット 各細胞集団の細胞数および全細胞集団に占める割合
オプション： 抗原特異的T細胞の分離・回収 （セルソーティング）	別途お問い合わせください。

納品方法： メール添付（パスワード付きZIPファイル）またはCD-R等

ご依頼

「解析依頼書」および別紙「サンプルリスト」に必要事項をご記入いただき、担当販売代理店までご提出ください。
「解析依頼書」はこちらからダウンロードいただけます。
※ご依頼の際は、「解析依頼書」に添付の「解析サービスのご利用にあたり」を必ずご確認ください。

サンプルのご送付

解析に必要なサンプルを、下記の送付先までご送付ください。月～金曜日（祝祭日を除く）着にて手配をお願いいたします。解析内容により、送付日の調整をさせていただく場合がございます。

• サンプルには、解析依頼書別紙「サンプルリスト」を同梱してください。
• 各サンプルチューブ（もしくはプレート）に、解析依頼書別紙「サンプルリスト」に記入したサンプル番号もしくはサンプル名を明記してください。
• サンプルは、以下の輸送条件にて着払いでご送付ください。
• 専門業者による輸送も承っております。ご希望の場合は事前にご相談ください。

サンプルの保存条件	輸送条件
冷蔵（4℃）	保冷剤梱包・冷蔵便
冷凍（-20℃）、超冷凍（-80℃）	ドライアイス梱包・冷凍便