ELISPOT解析
ELISPOT解析により、ヒト末梢血単核球（PBMC）中に存在する細胞傷害性T細胞（CTL）から産生されるIFN-γ を単一細胞レベルで検出し、抗原特異的な免疫応答を確認します。ELISPOT解析は、がんや自己免疫疾患、感染症、アレルギーなどの様々な疾患において、抗原特異的免疫応答を研究するために幅広く利用されています。
特長
- 日本国内完結型の受託解析サービス
- CTLによる免疫応答（IFN-γ 産生）を検出
- 前培養によりサンプル中に存在するペプチド特異的CTLを増殖させることで、存在頻度の低いCTLも検出可
- 「申請資料の信頼性の基準（医薬品、医療機器等の品質、有効性及び安全性の確保等に関する法律施行規則第43条）」に準拠した試験にも対応
解析内容
ご提供いただいたヒトPBMCを前培養した後、ELISPOT解析を用いてCTLから産生されるIFN-γ を単一細胞レベルで検出します。前培養なしでの実施や、スポット計数のみのご依頼も承ります。
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- 前培養（IVS）
- ELISPOT解析の前に、PBMCをペプチドおよびサイトカインで刺激を加えながら2週間培養します（in vitro sensitization；IVS）。ペプチド特異的CTLを活性化し増殖させることができ、存在頻度の低いCTLによる免疫応答を検出する場合に推奨しています。
- ELISPOT解析
- IFN-γ 特異的なキャプチャー抗体が固相化されたウェルにPBMCを播種し、ペプチド提示細胞と共培養します。ペプチド特異的CTLから産生されたIFN-γ とキャプチャー抗体が結合することで、細胞が位置していた場所にスポットが形成されます。形成されたスポットを、ImmunoSpot アナライザー（Cellular Technology Limited）で自動計数します。
受託パターン
| ELISPOT解析 | ご提供いただいたPBMCを前培養後、IFN-γ ELISPOT解析を実施し、検出したスポット数データおよびELISPOTプレートの撮影画像をご報告いたします。 |
|---|---|
| ELISPOT解析 （前培養なし） |
ご提供いただいたPBMCを用いて、前培養せずにIFN-γ ELISPOT解析を行います。検出したスポット数データおよびELISPOTプレートの撮影画像をご報告いたします。 |
| スポット計数のみ | お客様でELISPOT解析を実施した後の乾燥済みプレートをお預かりし、スポット計数のみ行います。検出したスポット数データおよびELISPOTプレートの撮影画像をご報告します。ELISPOT解析でのサイトカインの種類によらず対応可能です。 |
ご提供いただくサンプル
以下の条件を満たさない場合や、ウイルス等による感染性が疑われるサンプルの場合は事前にご相談ください。
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| 解析内容 | 材料 | 必要量 | 保存容器 | 保存方法 |
|---|---|---|---|---|
| ELISPOT解析 | ヒトPBMC | 6×106cells程度 （抗原ペプチド1種類あたり） 解析条件に依存するため要相談 |
1.5～2 mL チューブ |
細胞保存液を添加し、 -80℃ |
| 抗原ペプチド | 粉末 2 mg （凍結乾燥、純度95%以上） |
0.5～2 mL チューブ |
各ペプチドの最適保存条件 にて保存 |
|
| ELISPOT解析 （前培養なし） |
ヒトPBMC | 6×106 cells程度 （抗原ペプチド1種類あたり） 解析条件に依存するため要相談 |
1.5～2 mL チューブ |
細胞保存液を添加し、 -80℃ |
| 抗原ペプチド | 粉末 1 mg （凍結乾燥、純度95%以上） |
0.5～2 mL チューブ |
各ペプチドの最適保存条件 にて保存 |
|
| スポット計数のみ | 発色済み 96ウェルプレート |
― | ― | 室温 |
価格・納期
ご依頼の内容により異なりますので、お問い合わせください。
納品物
以下のデータを納品いたします。
- ELISPOTプレート画像（JPEG）
- スポット計数結果（Excel）
納品方法：メール添付（パスワード付きZIPファイル）またはCD-R等
ご依頼方法
詳細は「受託解析サービス ご利用案内」をご参照ください。
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ご依頼
「解析依頼書」および別紙「サンプルリスト」に必要事項をご記入いただき、担当販売代理店までご提出ください。
「解析依頼書」はこちらからダウンロードいただけます。
※ご依頼の際は、「解析依頼書」に添付の「解析サービスのご利用にあたり」を必ずご確認ください。
サンプルのご送付
解析に必要なサンプルを、下記の送付先までご送付ください。月～金曜日（祝祭日を除く）着にて手配をお願いいたします。解析内容により、送付日の調整をさせていただく場合がございます。
- サンプルには、解析依頼書別紙「サンプルリスト」もしくは「プレートリスト」を同梱してください。
- 各サンプルチューブ（もしくはプレート）に、解析依頼書別紙「サンプルリスト」（もしくは「プレートリスト」）に記入したサンプル番号もしくはサンプル名を明記してください。
- サンプルは、以下の輸送条件にて着払いでご送付ください。
- 専門業者による輸送も承っております。ご希望の場合は事前にご相談ください。
| サンプルの保存条件 | 輸送条件 |
|---|---|
| 室温 | 通常便 |
| 冷蔵（4°C）、冷凍（-20°C）、超冷凍（-80°C） | ドライアイス梱包・冷凍便 |
送付先
CPMクリニカルラボ神奈川県川崎市川崎区殿町3-25-10 Research Gate Building TONOMACHI2 1F
留意事項
- 倫理審査を要する研究に本サービスの結果をご利用される場合は、ご所属機関における倫理審査委員会の承認を得たうえでご依頼ください。詳細は、「ヒトゲノム・遺伝子解析受託サービスについて」をご確認ください。
- サンプルにウイルス等による感染を疑うべき事情がある場合は、必ず弊社にご相談ください。安全の確認がとれない場合には、サービスの提供ができない場合がありますので、予めご了承ください。
- 個人情報に関しては、個人が特定できないよう匿名化したうえでご提供ください。
- お客様より提供いただいたサンプルおよび解析データ等は、業務終了後30日間保管し、当該期間の経過後に廃棄いたします。返却をご希望の場合は、事前にご相談ください。